[NovoPro] pcDNA3.1(+) vector

[NovoPro 한국공식대리점]

[NovoPro] pcDNA3.1(+) vector

Information:

• Name: pcDNA3.1(+)
• Antibiotic Resistance: Ampicillin
• Length: 5431 bp
• Type: Mammalian Expression Vectors
• Replication origin: ori
• Source/Author: Invitrogen (Life Technologies)
• Selection Marker: Neomycin/G418(Geneticin)
• Copy Number: High copy number
• Promoter: SV40
• 3' Primer: M13 rev
• Growth Strain(s): DH10B
• Growth Temperature: 37℃

Plasmid Protocol:

• 5,000×g에서 5분간 원심분리합니다.
• 튜브를 조심스럽게 개봉한 후 멸균수(sterile water)를 추가하여 DNA를 용해합니다. 플라스미드 5 μg 기준: 20 μl 추가, 플라스미드 100 μg 기준: 100 μl 추가
• 튜브를 닫고 실온에서 10분간 배양합니다.
• 짧게 vortexing 후 quick spin을 통해 용액을 튜브 하단으로 모읍니다. 속도는 5,000×g 이하로 수행합니다.
• 플라스미드는 -20℃에서 보관합니다.
• 플라스미드 재용해 후 농도 측정 값은 명목상 수치와 다를 수 있습니다. 이는 동결건조 플라스미드의 위치, 재용해 효율, 측정 편차, 튜브 벽면 흡착 등의 영향 때문일 수 있습니다. 따라서 사용 전 플라스미드를 형질전환(transformation) 후 추출하여 사용하는 것을 권장합니다.

• Competent cells 100 μl를 취하여 얼음 위에서 10분간 해동합니다. 이후 플라스미드 2 μl를 추가하고, 얼음 위에서 30분간 반응합니다. 그 후 42℃에서 60초 heat shock을 진행하며, 흔들지 않습니다. 다시 얼음 위에서 2분간 처리합니다.
• 항생제가 포함되지 않은 LB 액체 배지 900 μl를 추가한 후, 37℃에서 45분 (또는 30℃에서 1~1.5시간) 동안 180 rpm으로 흔들어주면서 배양합니다.
• 6000 rpm에서 5분간 원심분리 후 상등액을 100 μl만 남기고 제거하여, bacterial pellet을 재현탁한 뒤 목표 plasmid 항생제 내성 LB plate에 도말합니다.
• 배지를 뒤집어 37℃에서 14시간 또는 30℃에서 20시간 배양합니다.
• 단일 콜로니(single colony)를 LB 액체 배지에 접종하고 해당 항생제를 추가한 뒤, 220 rpm에서 14시간 배양합니다.
• 이후 실험 목적에 따라 plasmid extraction kit 사용 지침에 맞춰 플라스미드를 추출합니다.

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